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worthington肝細胞分離系統產品信息簡介

更新時間:2021-10-14      點擊次數:1297


worthington肝細胞分離系統產品信息簡介

Hepatocyte Isolation System Product Information

 

大多數用于分離肝細胞的傳統方法使用粗制和部分純化的酶制劑,包括各種類型的膠原酶和其他蛋白酶。最近,使用更好表征的膠原酶制劑,例如 Worthington Types 1 和 4 (CLS-1, 4),已經提供了更好的結果。所有粗膠原酶制劑都可能包含批次不同的污染蛋白酶、酯酶和其他酶,需要研究人員預先篩選幾批酶和/或不斷修改分離參數和協議。

Worthington 肝細胞分離系統的開發旨在為研究人員提供可靠、方便且一致的肝細胞分離系統。通過使用該試劑盒中包含的預先優化的酶組合,可以最大限度地減少批次間的差異并提高分離肝細胞的質量。此外,Worthington 通過從成年大鼠中分離肝細胞來對每一批次進行使用測試,以確保活細胞的性能、可靠性和一致的產量。

該方法基于 Berry, MN 描述的方法,由 Seglen, PO 修改(細胞生物學方法,第 XIII 卷,David M. Prescott 編輯,學術出版社,1976 年;第 4 章,“分離大鼠肝細胞的制備", pp 29-83),并與幾位研究人員一起進一步優化。

穩定性/儲存:試劑在環境溫度下可在正常運輸程序中預期的時間內保持穩定,但包裝應在抵達時冷藏。內容物在使用前可在 2-8°C 下儲存 4-6 個月。儲存在 2-8°C。

包裝內容 包裝中包含足夠的材料,可用于五個單獨的成年大鼠肝臟灌注。對于較大或較小的組織應用,請在每個步驟中制備成比例的試劑,并按照協議中所述的相同比例將它們組合起來。

小瓶 #1:10X CMF-HBSS 濃縮液,1 瓶,500 毫升無菌不含鈣和鎂的漢克平衡鹽溶液 (CMF-HBSS)。在加入解離酶溶液之前,該溶液用于洗滌和灌注肝臟。

小瓶 #2:22,500 單位膠原酶和 30 單位彈性蛋白酶,5 小瓶 Worthington 膠原酶(代碼:CLS-1)和彈性蛋白酶(代碼:ESL),通過 0.22µm 孔徑膜過濾并凍干。使用前,用 L-15/MOPS 溶液重新配制,并按照以下程序的指示輕輕旋轉以溶解內容物。將未復溶的小瓶儲存在 2–8°C。

小瓶 #3:每瓶 1,000 單位 DNase I,5 小瓶 Worthington DNase I(代碼:D),通過 0.22µm 孔徑膜過濾并凍干。使用前,用 L-15/MOPS 溶液重新配制,并按照以下程序的指示輕輕旋轉以溶解內容物。將未復溶的小瓶儲存在 2–8°C。

小瓶 #4:0.15M MOPS,pH 7.5,1 瓶,75ml 0.15M MOPS,pH 7.5 緩沖液濃縮物,用于緩沖重組的 Leibovitz L-15 培養基。小瓶 #5:7.5% 碳酸氫鈉 (NaHCO3),1 瓶,100ml 7.5% 碳酸氫鈉濃縮液,用于緩沖稀釋的 CMF-HBSS。

小袋,裝有 Leibovitz L-15 培養基粉末,1 x 1 升 通過切開信封頂部并將內容物倒入裝有大約 800 毫升細胞培養級水的燒杯中,重構小袋中的全部內容物。再用 100 毫升水沖洗小袋 2 - 3 次。使總體積達到 1000 毫升并通過 0.22 微米孔徑的膜過濾。

參考

Alpini 等,“肝細胞分離的最新進展",Hepatology (1994) 20:494-514。

貝里,明尼蘇達州,愛德華茲,上午和巴里特,GJ;分離的肝細胞:制備、特性和應用,RH Burdon 和 PH Van Knippenberg,編輯,愛思唯爾,阿姆斯特丹,紐約,牛津,第 1 章。2, 1991.

Chen HL、Wu Hl、Fon CC、Chen PJ、Lai、MY、Chen DS (1998) 成人肝細胞的長期培養。生物醫學科學 5:435-440

DeRobertis, EDP, Saez, FA 和 DeRobertis, EMF: Cell Biology, 6th ed., WB Saunders Co., Philadelphia, PA, 1975。

Freshney, R. Ian:動物細胞培養,Alan R. Liss, Inc.,紐約,2000 年。

漢克斯、JH 和*,RE:Proc。社會。經驗。生物。醫學,71, 196 1949。

Jakoby, WB 和 Pastan, IH:酶學方法卷。第 18 頁 121,學術出版社,1979 年。

Le Cluyse EL (2001) 用于體外評估細胞色素 P450 酶表達和調節的人類肝細胞系統。歐元。J Pharm Sci 13:343-368。

Le Cluyse EL, PL Bullock, A Parkinson (1996) 在大鼠肝細胞長期培養中恢復和維持正常肝臟結構和功能的策略。高級 Drug Del Rev 22:133-186。

Leibovitz, A.:與大氣自由氣體交換的組織/細胞培養物的生長和維持,Am。J. Hyg., 78, 173, 1963。

Seglen,PO,細胞生物學方法,卷。XIII,David M. Prescott 編輯,Ch。4,第 29-83 頁,學術出版社,1976 年。

沃辛頓酶手冊,沃辛頓生化公司,新澤西州弗里霍爾德,1993 年。

沃辛頓組織解離指南,沃辛頓生化公司,新澤西州萊克伍德,2003 年。 

相關產品:

膠原酶 (CLS1-4/CLSPA)
脫氧核糖核酸酶I (DP/D/DCLS/D2/DPFF/DPRF)
彈性蛋白酶 (ES/ESL)
透明質酸
酶 ( HSE/HSEP)中性蛋白酶 (Dispase, NPRO)
木瓜蛋白酶 (PAP/PAPL/PAP2)
蛋白酶 K (PROK)
胰蛋白酶 (TL/TRL/TRL3/TRLS/TRTPCK)
胰蛋白酶抑制劑 (LBI/OI/SI/SIC)

細胞分離優化系統 (CIT)
新生兒心肌細胞分離系統 (NCIS)
木瓜蛋白酶解離系統 (PDS/PDS2)


描述活動代碼貨號價錢

肝細胞分離: N/A
用于執行五次單獨成年大鼠肝臟灌注的試劑盒。包含五個一次性 CLSH 酶小瓶、五個一次性 DNase 小瓶、10X CMF-Hank's 平衡鹽溶液、L-15 培養基粉末、0.15M MOPS 緩沖液、7.5% 碳酸氫鈉溶液和優化方案。該套件由 Worthington 進行了使用測試,以確保性能。 
儲存在 2-8°C。

hisLK002060460.00 美元

膠原酶/彈性蛋白酶小瓶 (CLSH)
來源: HIS 試劑盒中的Clostridium histolyticum
酶小瓶,其中包含 20,000 單位的膠原酶(代碼:CLS-1)和 30 單位的彈性蛋白酶(代碼:ESL),通過 0.22 微米膜過濾并凍干。 
儲存在 2-8°C。
每瓶≥20,000 單位膠原酶/30 單位彈性蛋白酶CLSHLK00206654.00 美元
LK002067237.00 美元

DNase Vial (D2)
來源:牛胰腺
木瓜蛋白酶解離系統的一個組成部分。這種材料是 0.22 微米膜過濾并在高壓滅菌的小瓶中凍干的。用 0.5 ml EBSS 或等價物重構的小瓶產生 2000 單位/ml 脫氧核糖核酸酶 (1 mg/ml) 的溶液。 
儲存在 2-8°C。
每瓶≥1,000 Kunitz單位D2LK00317025.00 美元
LK00317284.00 美元

Hank's 平衡鹽溶液 10X (HBSS10)
來源: N/A
無菌無鈣和鎂 Hank's 平衡鹽溶液,10X CMF-HBSS 濃縮物,在 HIS 試劑盒中提供;1 x 500 ml 
儲存于 2-8°C。

HBSS10LK00206485.00 美元

L-15 培養基粉末 (L15NK)
來源: N/A 
Leibovitz L-15 培養基粉末,NCIS 套件的一個組件。用細胞培養級水和 0.22 微米過濾器將小袋、QS 的全部內容物重新溶解至 1 升。適用于細胞分離和培養應用。 
儲存在 2-8°C。

L15NKLK00325030.00 美元

0.15米,MOPS緩沖液,(MOPS)
來源: N / A 
0.15M MOPS,pH為7.5,0.22u過濾。用于在肝細胞分離系統中緩沖構成的 Leibovitz L-15 培養基的緩沖液濃縮物。 
儲存在 2-8°C。

拖把LK00207036.00 美元

碳酸氫鈉,7.5%,(NAH)
來源: N / A 
7.5%碳酸氫鈉濃縮物(的NaHCO 3),用于緩沖稀釋CMF-HBSS; 1 x 100 ml 
儲存于 2-8°C。
不適用NAHLK00206933.00 美元

 

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